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- 产品名称： First Strand cDNA Synthesis Kit
- 产品货号： 24101
- 货期： 现货
- 价格与订购： 452
- 数量：
库存：
- 规格： 20rxn
- 产品信息
- 如何订购
产品概述
本产品是使用重组鼠白血病毒逆转录酶(Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase,M-MuLVRT)，从总RNA或者Poly(A)+RNA合成第一链cDNA的试剂盒，含有cDNA第一链合成所需的所有试剂（5×ReactionBuffer内含dNTP）。M-MuLV具有DNA聚合酶活性，延伸能力较强，最大限度的将RNA转录成第一链cDNA。合成的第一链cDNA可广泛应用于第二链合成、杂交、PCR扩增、Real-timePCR反应等。
产品组成
| 组分 | 24101-01 (20 rxn) |
| Oligo dT Primer (50 μM ) | 20 μL |
| 5 × Reaction Buffer | 80 μL |
| Ribonuclease Inhibitor (40 U/μL) | 20 μL |
| M-MuLV Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 20 μL |
| DEPC-treated Water | 240 μL |
保存条件
-20℃保存一年
操作步骤
1. 冰上配置以下体系：
| 总RNA或Poly(A)+或特异性RNA | 0.5μg-5μg |
| Oligo dT Primer(50μM) | 1μL |
| DEPC-treated Water | 加到14μL |
混匀样品并离心 3-5 s，65℃ 5 min，冰上放置 1 min 冷却；
2. 向冷却后的 PCR 管中加入以下组分：
| 5×Reaction Buffer | 4μL |
| Ribonuclease Inhibitor(40U/μL) | 1μL |
| M-MuLV Reverse Transcriptase | 1μL |
3. 轻弹混匀并离心 3-5 s，按如下程序进行反转录反应：
| 42℃ | 30min* |
| 95℃ | 5min**，冰上放置或-20℃保存。 |
注：*可以适当延长反应时间（或者提高 RNA 浓度），从而提高产量。
**对于扩增长链cDNA，可使用70℃ 15 min，做酶失活处理，高温处理对cDNA有损伤；扩增短链cDNA， 可以进行 95℃ 5 min 使酶失活。
注意事项
1. RNA 样品要避免基因组 DNA 污染。用于 cDNA 合成的器具须用 0.1% DEPC（焦碳酸二 乙酯）水溶液 37°C 浸泡 12 h；然后在 120°C 高压灭菌 30 min 去除残留的 DEPC。
2. 用于 RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌(180°C，60min)或者上述 DEPC 处理的器具盛装， 使用的无菌水须用 0.1% DEPC 处理后进行高温高压灭菌。建议 RNA 实验使用的器具、试剂 和无菌水专用。
3. 不必从总 RNA 中分离 Poly(A)+ mRNA，但以 Poly(A)+ mRNA 为模板可以提高终产物得 率和纯度。
4. 提高反应温度到 45°C 有利于解决富含 GC 二级结构的 mRNA 问题。但 M-MuLV RT 的 热敏感性会降低 cDNA 合成物的产量。
5. cDNA 产物应置于-20°C 保存。
6. 在进行实验操作时应将酶放置于冰上，待实验结束后于-20°C 保存。
Note
For research use only. Not suitable for clinical or therapeutic use.
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